在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。

 

　　由于弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用，因此生化实验室常常用的缓冲系主要有柠檬酸、碳酸、磷酸、巴比妥酸、醋酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统。

 

　　在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如柠檬酸盐、硼酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。

 

　　柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。

 

　　硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。

 

　　磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。

 

　　三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点是温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。

 

　　缓冲液的pH值由哪些因素决定？

 

　　设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：

 

　　根据此式可得出下列几点结论：

 

　　（1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。

 

　　（2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。

 

　　（3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为*高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。

 

　　从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。